Saronom Silaban Primary Author mixed material bibliography Bandung program doktor Ilmu Kimia 2016 id Indonesia

xix,;149 hlm,;29 cm Mendesaknya kebutuhan metode pengganti teknik jahitan dalam berbagai pembedahan telah menjadi perhatian dunia kesehatan, juga di Indonesia. Lem fibrin (LF) merupakan dua komponen (trombin dan fibrinogen) yang menghasilkan proses akhir pembekuan darah untuk menutup dan merekatkan luka, dan dapat digunakan sebagai bahan pengganti teknik jahitan yang lebih menguntungkan. LF akan mernbentuk bekuan fibrin yaitu polimer dari rnonomer fibrin yang diturunkan dari fibrinogen yang telah mengalami pemotongan oleh trombin. Monomer fibrin adalah fibrinogen yang telah kehilangan fibrinopeptida A maupun B. Selanjutnya monomer fibrin secara spontan akan menyusun diri membentuk polimer fibrin berstruktur serabut. Lem Fibrin yang didapat secara komersial relatif mahal dan mengandung protein plasma yang dimurnikan dari sumber darah lain, sehingga beresiko terjadinya kontaminasi patogen secara bersamaan dengan perawatan. LF otologus aman untuk digunakan, namun penyediaan komponen utamanya seperti trombin sulit, lama dan butuh laboran terlatih. Tujuanpenelitian ini adalah memproduksi pretrombin-2 (PT2) dalam sistem ekspresi Escherichia coli untuk trombin yang memiliki aktivitas sebagai komponen LF. Dalam penelitian ini dilakukan konstruksi galur unggul penghasil PT2, proses hulu produksi, dan proses hilir. Selanjutnya PT2 diaktivasi menjadi trombin dengan ekarin dan diuji aktivitasnya dengan substrat kromogenik S2238, serta secara in vivo pada mata kelinci. Hasil ekspresi protein fusi (CBD-Intein­ PT2) dalam galur E. coli BL21(DE3) ArcticExpress yang mengandung CpnlO dan Cpn 60 memperlihatkan bahwa, protein fusi berhasil diekspresikan dalam bentuk terlarut. Pada proses hulu, optimasi produksi protein fusi dan densitas sel yang tinggi dapat diperoleh pada IPTG 0,1 mM dan suhu 12°C. Selanjutnya pada proses hilir, optimasi pemisahan dan pemurnian PT2 dalam kolom kitin yang dimediasi intein dicapai pada pH 6,5 dan suhu 25°C. PT2 berhasil diaktivasi menjadi trombin oleh ekarin dan memiliki aktivitas sebesar ~ 1,5 unitlrnL. Secara in vivo, trombin rekombinan hasil aktivasi ekarin dapat merekatkan jaringan yang luka setelah 30 detik perlakuan. Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa, trombin rekombinan dapat berfungsi aktif sebagai komponen lem fibrin (bersama fibrinogen) untuk perekat jaringan. Silaban Saronom PT2, optirnasi kodon, E. coli BL21(DE3) ArcticExpr 540 Sil p Perpustakaan Universitas Padjadjaran Kementerian Riset Teknologi dan Pendidikan Tinggi 540 Sil p/R.14.18.2 0754 Perpustakaan Pusat 20%252Fscan0001.jpg.jpg 8852 2017-04-01 15:33:23 2017-10-06 09:05:00 machine generated