Gaffar, Shabarni Primary Author mixed material bibliography Bandung Program Pasca Sarjana 2011 id Indonesia

xxii,;163 hlm,;29 cm ABSTRAK Pengaruh modifikasi peptida sinyal, dosis gen dan ko-ekspresi Protein Disulfide Isomerase (PDI) terhadap tingkat sekresi a-amilase Saccharomycopsis fibuligera R64 (Sfamy) daiam sistem ekspresi Pichia pastoris diselidiki disini. Modifikasi peptida sinyal dilakukan melalui peningkatan hidrofobisitas peptida sinyal Sfamy dengan mengganti peptida sinyal Sfamy natif dengan peptida sinyal modifikasi yang mengandung 15 asam amino peptida sinyal a-amilase saliva mencit digabung dengan daerah-pro peptida sinyal a-mating factor (a-MF) Saccharomyces cerevisiae. Peningkatan dosis gen dilakukan melalui penapisan transforman P. pastoris yang membawa gen pengode Sfamy (ALP!) multikopi, sedangkan peningkatan efisiensi pelipatan protein dilakukan melalui ko-ekspresi komponen pelipatan protein, yaitu Protein Disulfide Isomerase. Tiga jenis plasmid ekspresi, membawa gen ALPI dengan urutan sinyal modifikasi (pPICZA-MSALP/), urutan sinyal natif (PPICZA-WTALP.i) dan urutan sinyal a-MF (pPICZaA-AL,P./), telah dikonstruksi. P. pastoris GS115 ditransformasi secara terpisah menggunakan masing-masing plasmid. Penapisan transforman P. pastoris yang membawa gen ALP! multikopi dilakukan dengan metoda penapisan zeocin. Untuk mempelajari pengaruh ko-ekspresi PDT!, dikonstruksi plasmid pP1C3.5K-PDH dan dimasukkan ke dalam P. pastoris yang telah rnembawa gen MS-ALP 1 multikopi. Masing¬masing P. pastoris rekombinan yang membawa gen MS-ALP!, WT-ALP1, a-ALP.1 dan MS-ALPIIPDI1 digunakan untuk mengekspresikan ALP! dan dibandingkan level sekresinya. Modifikasi peptida sinyal meningkatkan level sekresi Sfamy oleh P. pastoris 3,3-kali dibanding peptida sinyal natif dan 1,2-kali dibanding peptida sinyal a-MF. Hasil ini menunjukkan bahwa modifikasi peptida sinyal yang meningkatkan hidrofobisitas menghasilkan pengenalan MS-ALP1 yang lebih baik oleh perangkat sekresi P. pastoris, sehingga meningkatkan efisiensi translokasi Sfamy dan meningkatkan level sekresi. Peningkatan dosis gen yang diidentifikasi melalui peningkatan resistansi terhadap antibiotik zeocin meningkatkan level sekresi Sfamy daiam semua P. pastoris, yang mengandung ALPI dengan peptida sinyal modifikasi, natif, maupun a-MF. Tingkat sekresi Sfamy oleh P. pastoris [MS' ALP]]multikopi ditemukan paling tinggi. Bila dibandingkan dengan P. pastoris yang mengandung satu kopi PVT- ALP], maim telah terjadi peningkatan sekresi Sfamy sebanyak 11-kali pada P. pastoris WS-ALP1] yang resistan zeocin 2000 pg/ML. Selanjutnya, ko-ekspresi PDI1 daiam P. pastoris menambah jumlah PDT dalam sel P. pastoris rekombinan, sehingga jumlah Sfamy yang rnengalami pelipatan dengan tepat akan meningkat. Sekresi Sfamy oleh P. pastoris yang membawa MS-ALP] multikopi dan PDI1 meningkat 2 kali dibandingkan tanpa ko-ekspresi PDT]. Kesimpulannya, kombinasi modifikasi peptida sinyal, peningkatan jumlah kopi gen dan ko-ekspresi PDI1 meningkatkan sekresi Sfamy olth P. pastoris. 20x lipat dibanding P. pastoris [WT-ALPI] satu kopi. Gaffar, Shabarni Kata kunci: peptida sinyal, dosis gen, pelipatan p 540 Perpustakaan Universitas Padjadjaran Kementerian Riset Teknologi dan Pendidikan Tinggi 540 Gaf p/R.14.12 01001110100143 Perpustakaan Pusat (REF.14.12) 540 Gaf p/R.14.12 scan0001.jpg.jpg 13941 2017-04-01 15:58:49 2017-07-17 10:03:46 machine generated